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Accutase替換胰酶/EDTA/細胞消化液

ACCUTASETM細胞消化液

傳統(tǒng)貼壁細胞消化（胰酶/EDTA）的*替換產(chǎn)品

Accutase替換胰酶/EDTA/細胞消化液描述：

Mpbio公司提供的ACCUTASE™具有蛋白酶和膠原酶活性，是胰酶/EDTA的替換產(chǎn)品，用于從常規(guī)組織培養(yǎng)器皿和粘附培養(yǎng)器皿中消化細胞。另外進行細胞計數(shù)、轉(zhuǎn)染或分析檢測（如流式細胞術(shù)）前，常加入一定量的accutase，將細胞集落 (clumps)分散成單個細胞然后進行下游實驗。Accutase因其消化方式溫和，對細胞傷害極低，不含任何動物或細菌來源組分等特點成功替代傳統(tǒng)消化產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于常規(guī)貼壁細胞（血清培養(yǎng)細胞和無血清培養(yǎng)細胞）的消化，以及成為干細胞（如hESCs、mESCs等）傳代培養(yǎng)的產(chǎn)品之一。即用型的無菌產(chǎn)品，使用非常方便。

ACCUTASETM細胞消化液配方：

Accutase具蛋白酶和膠原酶活性，以Dulbecco’s PBS溶液（含0.5 mM EDTA·4Na和酚紅）形式供應(yīng)。

ACCUTASETM細胞消化液優(yōu) 勢： 
● 應(yīng)用于絕大多數(shù)原代細胞和哺乳動物細胞系的消化
實驗驗證的細胞系（cellline）：成纖維細胞,角蛋白細胞,血管內(nèi)皮細胞,肝細胞,血管平滑肌細胞,肝細胞祖細胞,原代雞胚神經(jīng)細胞,骨髓干細胞,貼壁CHO和BHK細胞,巨噬細,293細胞,L929 細胞,*性小鼠睪丸生殖細胞，3T3,Vero ,COS,HeLa,NT2,MG63, M24,A375轉(zhuǎn)移性黑色素瘤,神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251和D54,HT1080纖維肉瘤細胞,Sf9 昆蟲細胞。（參考文獻1-9）
● 溫和有效的消化胚胎干細胞（hESCs和mESCs）,凍存后細胞具更高復(fù)蘇率（圖2，文獻10）
● 幾分鐘內(nèi)實現(xiàn)粘附細胞的分離，不需清洗或中和反應(yīng)，節(jié)省細胞傳代時間
● 溫和而快速的分離貼壁細胞，不會破壞流式細胞術(shù)檢測的表面抗原
● 溫和消化維持zui高細胞活力，即使長時間消化（45 min）細胞活力達97 ± 3%（圖1）
● 同時結(jié)合膠原酶和蛋白酶活性，不含哺乳動物、細菌來源產(chǎn)品或昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)組分

應(yīng) 用： 
（1）替換胰酶/EDTA（Replacing Trypsin/EDTA）
Accutase的用量和方法不需做改動，特別適用于在無血清和無蛋白培養(yǎng)基等不含血清的培養(yǎng)基內(nèi)貼壁細胞的分離。相比于胰酶/EDTA，優(yōu)點在于：即用型，使用方便；大大降低對細胞的傷害；提高細胞產(chǎn)量及細胞活力；增高鋪板效率；改善細胞形態(tài)（定性）和細胞生長特性。
（2）功能分析（functional assays）
細胞表面標志物分析，流式細胞術(shù)，血清饑餓法檢測細胞靜止狀態(tài)，細胞增殖，轉(zhuǎn)染實驗，細胞趨觸分析，細胞、神經(jīng)嵴遷移實驗，腫瘤細胞遷移。
（3）組織解離（tissue disaggregation）
在4-25℃下進行組織解離，因酶的特性切忌在37℃操作。根據(jù)組織類型和解離溫度優(yōu)化解離時間。一般情況下，4℃過一夜孵育（12-16hrs），25℃孵育1-2 hrs。
應(yīng)用實例： 


操作步驟：（快速簡單）
（1）37℃或室溫溶解Accutase，用無菌PBS溶液清洗細胞培養(yǎng)容器（培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶等） 。
（2）以無菌操作的方式按 75 cm2表面積加入10 ml Accutase的量覆蓋貼壁細胞；重新放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，消化15-20 min。（消化時間可自行調(diào)整。大部分細胞處于Accutase中高達1小時，對細胞無影響）
（3）消化結(jié)束后，依常規(guī)操作進行細胞計數(shù)和傳代：不需另做清洗和酶活終止步驟。

訂購信息：

應(yīng)用文獻：
（1）A cell-detachment solution can reduce background staining in theELISPOT assay, Grant A, et al., Methods of Molecular Biology, 2005;302:87-94.
（2）Canine hemangiosarcoma originates from hematopoietic precursors withpotential for endothelial differentiation, Lamerota-Kozicki et al.,Experimental Hematology, Vol. 34 Pages 870-878, April 2006.
（3）The JAK3 inhibitor WHI-P154 prevents PDGF-evoked process outgrowthin human neural precursor cells, Richards et al., Journal ofNeurochemistry, Vol. 97 Page 201, April 2006.
（4）Nuclear factor-КB controls the reaggregation of 3D neurospherecultures in vitro, Widera et al.,European Cells and Materials, Vol. 11,Pages 76-85, 2006.
（5）Autologous adult rodent neural progenitor cell transplantationrepresents a feasible strategy to promote structural repair in thechronically injured spinal cord, Pfeifer, Future Medicine, Pages255-266, July 2006.
（6）Integrin Signalling Regulates the Nuclear Localization and Functionof the Lysophosphatidic Acid Receptor-1 (LPA1) In MammalianCells, Waters et al. Biochemical Journal Immediate Publication, May 2006
（7）Minute numbers of contaminant CD8+ T cells or CD11b+CD11c+ NK cellsare the source of IFN-γ in IL-12/IL-18-stimulated mouse macrophagepopulations, Schleicher et al., Blood Vol. 105,Pages 1319-1328, February 2005.
（8）Cell Permeable Peptide of JNK Inhibitor Prevents Islet ApoptosisImmediay After Isolation and Improves Islet GraftFunction, Noguchi et al., American Journal of Transplantation, Vol.5,Pages 1848-1855, August 2005.
（9） Rescue Purification Maximizes the Use of Human Islet Preparationsfor Transplantation, Ichii et al., American Journal of Transplantation,Vol. 5, Pages 21-30, © 2005.
（10）Efficient Propagation of Single Cells Accutase-Dissociated HumanEmbryonic Stem Cells. RUCHI BAJPAI,MOLECULAR REPRODUCTION AND DEVELOPMENT