產品名稱：南美胎牛血清

產品貨號：10270-106

品牌：Gibco

貨號：10270-106

規(guī)格：500ML

來源：SOUTH AMERICA

級別：優(yōu)等

關于細胞不貼壁原因及解決辦法：

胰蛋白酶消化過度

支原體污染

培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）            

細胞老化

接種細胞起始濃度太低或太高

解決方法：

縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度

分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養(yǎng)物

啟用新的保種細胞

調節(jié)*接種細胞濃度

產品介紹：

收到血清后血清中因含有許多蛋白質，反復凍融對蛋白的活性肯定會有一定的影響，這似乎已*。因此，如果幾次內用不完，應盡量分裝，這不僅適用于血清，也適用于其他儲存于-20℃的蛋白質類產品。

曾有研究發(fā)現，血清凍融三次，對腫瘤標志物的濃度影響不大，對于血漿，有報道在短時間內反復凍融三次，對總蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影響不大，但作者推測對免疫球蛋白的活性有影響2。zui重要的是一篇西北民族學院的文章，《反復凍融新生牛血清對促細胞生長效應的影響》，作者針對SP2/0細胞，用MEM培養(yǎng)基和三批新生牛血清進行培養(yǎng)。血清分別凍融4次至28次不等。然后繪制細胞生長曲線，根據公式t =T/A , A=log2 Y/X計算細胞倍增時間（t 為細胞倍增時間， Y 為細胞峰值前1 d 的細胞數， X 為接種細胞數， T 為細胞生長時間）。結果顯示：選用的三批新生牛血清在反復凍融 28 次時， 血清促細胞生長的zui大增殖量變化不大，均高于1×106/mL, 但是血清促細胞生長的倍增時間在反復凍融 20次時延長， 即血清促細胞繁殖一代所需的時間在凍融次數達到 20 次時顯著增加。筆者觀察了一下該文章的結果列表，發(fā)現在凍融20次之前，細胞倍增時間延長2-3小時不等，20次時，則延長3-4小時。可見，影響還是比較顯著的。該文章的局限是針對新生牛血清，而沒有對胎牛血清進行測試。

國外有人對大鼠血清中的18種化學成分進行了檢測，發(fā)現反復凍融3次對其中的14種成分沒有顯著影響，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，膽紅素，甚至包括氯離子有一些明顯變化，但其濃度變化控制在10%以內。

總而言之，如果能避免牛血清的反復凍融，及時分裝，那是的。如果在短時間內有幾次反復凍融，也不用過于擔心。但是，對于胎牛血清，還有一個問題，是反復凍融增高了血清產生沉淀或渾濁的風險。因為血清在融化時，冰塊和蛋白融化的速度是不一樣的，局部可能因蛋白濃度過高而產生沉淀。同時，如果血清內含有少量纖維蛋白原，那么在低溫下也可以形成絮狀沉淀，等到血清再融化時，沉淀就顯現出來了。所以，血清的質量也非常重要。

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